DAP-seq技术实验流程和原理(DAP-seq和ChIP-seq的不同特点)和适用物种(对象)范围

本文介绍了DAP-seq作为ChIP-seq的补充,如何通过体外蛋白表达技术鉴定转录因子结合位点,特别关注了在不同研究中DAP-seq的应用实例,如植物防御反应调控、种子耐受性增强和气孔开度调节等。

DAP-seq

在基因组水平上,鉴定转录因子的结合位点(transcription factor binding sites, TFBS)非常重要。ChIP-seq是进行体内检测TFBS的主要方法。然而,ChIP-seq依赖于抗体质量,这对低表达的蛋白质具有很大的挑战性。所以,ChIP-seq通常在规模上受到限制,难以进行高通量扩展。因此,只有少数转录因子可以获得结合位点信息,大量TFBS的覆盖范围仅适用于人类和一些模式生物。

DAP-seq具有与ChIP-seq同样的功能。通过体外蛋白表达技术,表达出带有标签的转录因子,和基因组DNA文库在体外进行结合,然后分离出所有与转录因子结合的DNA,再使用高通量测序,找到转录因子的结合位点。

DAP-seq是ChIP-seq的重要补充方法,可以应用于模式和非模式物种,一般来说,有参考基因组的物种都可以进行DAP-seq,如果没有参考基因组,数据下机之后是无法进行数据分析的,但是可以考虑使用近缘物种的参考基因组进行分析。

DAP-seq和ChIP-seq的特点

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实验流程图

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2022年8月,广西大学农学院甘蔗生物学重点实验室/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室张木清/姚伟研究团队在**Journal of Experimental Bota

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