【文献速递】：强强联手：邻近标记（PL）+邻近连接（PLA）揭开脂肪酸应激下PML核体新伙伴！

01 研究背景

PML核体（PML Nuclear Bodies, PML NBs）是细胞核内的亚结构域，参与调控多种细胞过程。在特定应激条件下（如脂肪酸过量、细胞衰老、肿瘤转化等），PML NBs会发生重构，形成非典型的PML亚结构，其中一种被称为LAPS（Lipid-Associated PML Structures）。PML（promyelocytic leukemia）蛋白是PML核体的主要结构蛋白，PML基因编码至少6种不同的PML蛋白亚型（isoforms），这些亚型通过其N端的RBCC结构域（RING-B-box-coiled-coil）形成寡聚体，并通过SUMO化修饰相互作用，招募多种客户蛋白（>150种），如转录因子、染色质重塑因子、激酶等。尽管已知PML NBs和LAPS在结构和功能上存在显著差异，但在脂肪酸应激条件下，PML蛋白的相互作用网络如何变化，仍然缺乏系统性的研究。

加拿大戴尔豪斯大学与谢布鲁克大学联合团队，2024年底发表于FEBS Letters“The proximity interactome of PML isoforms I and II under fatty acid stress”，利用APEX2邻近标记技术系统描绘PML I和PML II在脂肪酸应激（油酸处理）下的邻近互作组，并通过邻近连接（PLA）揭示PML核体的结合蛋白。

02 实验结果

他们先把PML-I/II与工程师酶APEX2融合，转染U2OS细胞。加底物生物素-苯酚＋H₂O₂，1分钟内APEX2催化产生短寿命自由基，把邻近蛋白的酪氨酸标记上生物素。Streptavidin（链霉亲和素）是一种由链霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的蛋白质，与生物素（biotin）具有极高亲和力。因此，用Streptavidin-Fluor488（绿色）染色被生物素标记的蛋白，绿色信号只出现在PML核体（颗粒状）或脂肪酸诱导的脂滴表面（环状），全核背景极低，对照APEX2-NLS仅产生弥漫性核内背景。然后用质谱分析，在脂肪酸应激下PML-I/II能同时“招募”COPII与ESCRT两大运输模块，为后续邻近连接（PLA）分析验证结合蛋白提供了依据。

图1 APEX2邻近标记筛选PML-I/II的互作蛋白（Thompson et al., 2025）。

用PLA在内源表达水平验证COPII“明星”—— SEC23B和SEC24A与PML发生了结合，未处理细胞每核2–3个红点，证实COPII与PML-NB“纳米贴近”；加脂肪酸后红点骤降50–75%，且PML敲除后红点几乎归零——说明应激让COPII“远离”PML，且且所有信号都依赖PML存在。

图2 PLA验证COPII外套蛋白SEC23B/24A与PML结合（Thompson et al., 2025）。

参考文献

Thompson J, Boisvert F M, Salsman J, et al. The proximity interactome of PML isoforms I and II under fatty acid stress[J]. FEBS letters, 2025, 599(5): 682-699.