5、体内神经元网络钙成像技术全解析

体内神经元网络钙成像技术全解析

1. 钙指示剂染色方法

1.1 小分子钙指示剂（SMCI）染色

• 溶液制备 ：将 SMCI 的乙酰氧甲基（AM）酯形式溶解在含 20%（w/v）普朗尼克 F - 127 的二甲基亚砜（DMSO）中，最终浓度为 10 mM。再用标准移液器溶液将该溶液进一步稀释 1/10 至 1/100，得到染色溶液。
• 移液器操作 ：使用移液器拉制器从玻璃毛细管拉制微移液器（填充标准移液器溶液时电阻为 6 - 9 MΩ，尖端直径约 1 mm），并填充约 7 μl 染色溶液。
• 插入与监测 ：使用显微操作器将移液器插入脑组织，用膜片钳放大器持续监测移液器电阻。穿透硬脑膜时，电阻可能暂时增加至 15 MΩ；若电阻稳定增加至超过 20 MΩ，则表明移液器堵塞，需更换。
• 染料注射与后续处理 ：当移液器到达所需深度，施加 70 kPa 正压 1 分钟将染料注入大脑。若移液器尖端位于皮质表面下方 150 - 200 mm，染料可使皮质表面下约 400 mm 范围内的神经元和神经胶质细胞染色；若针对更深皮质层，将移液器尖端置于软脑膜下方 650 - 700 mm。注射染料后移除移液器，约 1 小时后开始实验，以使染料完全去酯化。

1.2 基因编码钙指示剂（GECIs）染色

• 子宫内电穿孔法 ：这是一种快速方法，可使传感器在完整小鼠大脑中表达，无需长时间制备转基因